Определение биологически активных хлорнитрозамещенных бензофуроксанов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Хлорнитропроизводные бензофуроксана являются соединениями, проявляющими выраженную биологическую (антибактериальную, фунгицидную, NO-донорную) и другие виды активности и обладающими при этом низкой токсичностью. Для дальнейшей их фармацевтической разработки и создания лекарственных форм на их основе необходимы методы контроля качества, обеспечивающие избирательное и чувствительное определение действующих веществ. Для 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана (4,6-ДН-5,7-ДХБФО), 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана (5-Н-4,6-ДХБФО), а также технологических примесей их синтеза разработан способ одновременного определения аналитов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с диодно-матричным детектированием. Изучено их хроматографическое поведение при использовании различных обращенных фаз. Показано, что хорошее разделение компонентов достигается на амидной и нитрильной фазах. Установлены оптимальные условия хроматографического разделения при использовании колонки Discovery RP Amide C16 4.6×250 мм и изократическом элюировании смесью 0.05%-ная H₃PO₄ – ацетонитрил – метанол (51:34:15, об. %) при длинах волн детектирования 245 и 207 нм. Линейность градуировочных зависимостей достигается в интервале 0.5–200 мкг/мл с пределами детектирования до 0.12 мкг/мл. Разработанная методика использована для количественного определения хлорнитропроизводных бензофуроксана в их смесях и лекарственных формах на их основе.

1. Хмельницкий Л.И., Новиков С.С., Годовикова Т.И. Химия фуроксанов. Строение и синтез. М.: Наука, 1996. 383 с.

2. Хмельницкий Л.И., Новиков С.С., Годовикова Т.И. Химия фуроксанов. Реакции и применение. М.: Наука, 1996. 384 с.

3. Cerecetto H., González M. Benzofuroxan and furoxan. Chemistry and biology // Khan M.T.H. (Ed.) Bioactive Heterocycles IV. V. 10. Ser.: Topics in Heterocyclic Chemistry. V. 10. Berlin, Heidelberg: Springer, 2007. P. 265–308. https://doi.org/10.1007/7081_2007_064.

4. Cerecetto H., Porcal W. Pharmacological properties of furoxans and benzofuroxans: Recent developments // Mini-Rev. Med. Chem. 2005. V. 5, No 1. P. 57–71. https://doi.org/10.2174/1389557053402864.

5. Галкина И.В., Тахаутдинова Г.Л., Губайдуллин А.Т., Гнездилов О.И., Юсупова Л.М., Сахибуллина В.Г., Ильясов А.В., Галкин В.И. Синтез, строение и биологическая активность антимикробных соединений на основе дихлординитробензофуроксана и ароматических аминов / Учен. зап. Казан. ун-та. Сер. Естеств. науки. 2014. Т. 156, кн. 2. С. 24–36.

6. Галкина И.В., Юсупова Л.М., Бахтияров Д.И., Герасимов А.В., Исламов Д.Р., Литвинов И.А., Бахтиярова Ю.В. Синтез, молекулярная и кристаллическая структура 4,6-динитро-5,7-дихлор-2,1,3-оксадиазол-1-оксида // Журн. общ. химии. 2022. T. 92, № 12. С. 1819–1825. https://doi.org/10.31857/S0044460X22120010.

7. Чугунова Е.А., Газизов А.С., Бурилов А.Р., Юсупова Л.М., Пудовик М.А., Синяшин О.Г. Бензофуроксаны: их синтез, свойства и биологическая активность // Изв. АН. Сер. хим. 2019. Т. 68, № 5. С. 887–910.

8. Юсупова Л.М., Гармонов С.Ю., Захаров И.М., Быков А.Р., Фаляхов И.Ф., Гарипов Т.В. Фунгицидные и токсикологические свойства функционально замещенных нитробензофуроксанов // Хим.-фарм. журн. 2008. Т. 42, № 4. С. 27–29.

9. Jovené C.C., Chugunova E.A., Goumont R. The properties and the use of substituted benzofuroxans in pharmaceutical and medicinal chemistry: A comprehensive review // MiniRev. Med. Chem. 2013. V. 13, No 8. P. 1089–1136. https://doi.org/10.2174/1389557511313080001.

10. Chugunova E., Gibadullina E., Matylitsky K., Bazarbayev B., Neganova M., Volcho K., Rogachev A., Akylbekov N., Nguyen H.B.T., Voloshina A., Lyubina A., Amerhanova S., Syakaev V., Burilov A., Appazov N., Zhanakov M., Kuhn L., Sinyashin O., Alabugin I. Diverse biological activity of benzofuroxan/sterically hindered phenols hybrids // Pharmaceuticals. 2023. V. 16, No 4. Art. 499. https://doi.org/10.3390/ph16040499.

11. Chugunova E., Frenna V., Consiglio G., Micheletti G., Boga C., Akylbekov N., Burilov A., Spinelli D. On the nucleophilic reactivity of 4,6-dichloro-5-nitrobenzofuroxan with some aliphatic and aromatic amines: Selective nucleophilic substitution // J. Org. Chem. 2020. V. 85, No 21. P. 13472–13480. https://doi.org/10.1021/acs.joc.0c01502.

12. Chugunova E., Akylbekov N., Dobrynin A., Burilov A., Boga C., Micheletti G., Frenna V., Mattioli E.J., Calvaresi M., Spinelli D. 4,6-Dichloro-5-nitrobenzofuroxan: Different polymorphisms and DFT investigation of its reactivity with nucleophiles // Int. J. Mol. Sci. 2021. V. 22, No 24. Art. 13460. https://doi.org/10.3390/ijms222413460.

13. Ramazani A., Karimi M., Hosseinzadeh Z., Rezayati S., Hanifehpour Y., Joo S.W. Syntheses and antitumor properties of furoxan derivatives // Curr. Org. Chem. 2021. V. 25, No 7. P. 757–778. https://doi.org/10.2174/1385272825666210208183751.

14. Ingold M., de la Sovera V., Dapueto R., Hernández P., Porcal W., López G.V. Greener synthesis of antiproliferative furoxans via multicomponent reactions // Molecules. 2022. V. 27, No 6. Art. 1756. https://doi.org/10.3390/molecules27061756.

15. Mu Li, Feng S.-S., Go M.L. Study of synthesis and cardiovascular activity of some furoxan derivatives as potential NO-donors // Chem. Pharm. Bull. 2000. V. 48, No 6. P. 808–816. https://doi.org/10.1248/cpb.48.808.

16. Граник В.Г., Григорьев Н.Б. Оксид азота (NO). Новый путь к поиску лекарств. М.: Вузовская книга, 2004. 360 с.

17. Patil A.S., Pethe A.M. Quality by Design (QbD): A new concept for development of quality pharmaceuticals // Int. J. Pharm. Qual. Assur. 2013. V. 4, No 2. P. 13–19.

18. Lawrence X.Yu. Pharmaceutical quality by design: Product and process development, understanding, and control // Pharm. Res. 2008. V. 25, No 4. P. 781–791. https://doi.org/10.1007/s11095-007-9511-1.

19. Гармонов С.Ю., Юсупова Л.М., Якупова А.С., Фаляхов И.Ф., Сопин В.Ф. Спектрофотометрическое и хроматографическое определение 4,6-динитро-5,7дихлорбензофуроксана в биологически активной смеси // Хим.-фарм. журн. 2003. Т. 37, № 4. С. 52–53.

20. Юсупова Л.М., Бузыкин Б.И., Молодых Ж.В., Фаляхов И.Ф., Абдрахманов И.Ш., Хисамутдинов Г.Х., Беляев П.Г., Угрюмова В.С., Равилов А.З., Юсупова Г.Р., Шарнин Г.П., Булидоров В.В., Свиридов С.И., Анисимова Н.Н. Способ получения смеси 4-нитро- и 6-нитро-5,7-дихлорбензофуроксанов и смесь 4-нитро- и 6-нитро-5,7дихлорбензофуроксанов, обладающей бактерицидной, вирулицидной и спороцидной активностью. Патент РФ на изобретение № 2051913. 1996. Бюл. изобр. № 1.

21. Neue U.D. HPLC Columns: Theory, Technology and Practice. New York, NY: Wiley, 1997. 416 p.

22. LoBrutto R., Kazakevich Y. Chapter 4 – Reversed-phase HPLC // Kazakevich Y., LoBrutto R. (Eds.) HPLC for Pharmaceutical Scientists. Hoboken, NJ: John Wiley & Sons, 2007. P. 139‒239. https://doi.org/10.1002/9780470087954.ch4.

23. Aral H., Aral T., Çelik K.S., Ziyadanoğulları B., Ziyadanoğulları R. HPLC separation of different groups of small polar compounds on a novel amide-embedded stationary phase // Chromatographia. 2014. V. 77, No 11‒12. P. 771–781. https://doi.org/10.1007/s10337-014-2678-9.